[目的]本实验的目的是在布鲁氏菌S2308构建多铜氧化酶（BMCO）基因缺失株，探索缺失株在宿主细胞中的生长特性和生存能力，并分析BMCO蛋白的结构。[方法]利用PCR扩增-BMCO基因和Kan基因的上下游同源臂，通过融合技术对这三个基因进行融合。将融合片段与pMD19-t载体连接，产生牛布鲁氏菌S2308感受态细胞。将1800 V电压和400 V电阻电转换成牛布鲁氏菌S2308感受态细胞，并涂上耐Kan的布鲁氏菌固体培养基。选择阳性菌落，培养10代。检测第10代阳性菌落的遗传稳定性和生长趋势，将pBBR1MCS－4－BMCO融合质粒转移到布鲁氏菌，可稳定遗传BMCO基因缺失，并对阳性菌落进行培养和筛选。小鼠巨噬细胞RAW264。7株分别感染亲本株、缺失株和补体株，感染复合物（MOI）100。平板试验检测三株菌株的细胞内活力。【结果】成功获得了522、539和1054个片段大小的bp’s BMCO基因上下游同源arms和Kan基因。成功构建pMD19-t-bmco-kan融合片段重组载体。获得了具有稳定遗传的BMCO基因缺失株，并命名为S2308BMCO。BMCO基因回补株成功建成，并命名为BMCO：：奥罗斯。删除菌株的生长曲线与亲本菌株的生长曲线相同，均在12小时达到对数的生长期，进入高原期30小时。感染小鼠巨噬细胞RWA264.7后，S2308BMCO株的细胞内活力显著低于其亲本株S2308（P<0.01）。生物信息学的分析表明，BMCO属于疏水蛋白，位于胞质，含有大量不规则卷曲、螺旋和延伸链，表明该蛋白质有多个结合位点。[结论]本研究成功构建了来自布鲁氏菌和BMCO基因的缺失和补体菌株。BMCO基因基因的缺失不会影响其生长性能，但其在宿主细胞中的生存能力显著降低。我们初步分析了BMCO蛋白的结构，为布鲁氏菌分泌蛋白后续的功能研究奠定了基础。