为了探索供试烟草种质资源的遗传多样性和亲缘关系，促进烟草种质资源的高效利用和创新。利用20对引物对66份烤烟种质资源进行了遗传多样性分析。结果表明，在66份材料中，20对引物共检测到74个等位基因，平均数为3.7。Nei和Shannon铁塔的平均多样性分别为0.5728和0.8928。多态性信息含量（PIC）的变异范围为0.3503~0.7946，平均值为0.6104。供试材料的遗传距离变异范围为0.1270~0.6897，平均遗传距离为0.4172，雪茄种质与晒烟的最大遗传差异阈值为0.6897，晒烟的最小遗传差异阈值为0.1270。UPGMA聚类分析可以将受试材料按遗传距离0.415分为两组，并在此基础上分为七组。分类结果表明，大部分供试种质资源符合不同地理区划，少数供试种质资源存在偏差。本研究结果不仅可以为烟草种质资源的鉴定与创新、优良种质资源的选择与匹配、基因定位提供理论依据，而且有利于烟草种质资源的保护与利用。