星豹蛛PaCYP3001U16基因的克隆与表达分析

作者:王雅丽; 赵瑞; 王美; 张晓晨; 燕晶晶; 李锐
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为了探索细胞色素P450基因在星豹蛛Pardosa astrigera的表达特征及其对溴氰菊酯应激的反应,利用反转录PCR技术对细胞色素P450基因进行了克隆和测序,并利用实时荧光定量PCR(定量实时PCR,RT-qPCR)技术分析了其在星豹蛛雄蜘蛛和雌蜘蛛不同发育阶段和不同部位的表达水平,同时,分析了溴氰菊酯在不同浓度应力和不同处理时间下的表达模式。结果表明,色素P450基因的一个细胞是从星豹蛛的一只成年雌蜘蛛中克隆出来的。其开放阅读框是1473bp,编码490氨基酸,并命名为PaCYP3001U16(GenBank加入编号为MZ643213)。PaCYP3001U16基因在星豹蛛所有发育阶段均有表达,其中表达量在成年期表达最高,在6岁幼年期表达最低。PaCYP3001U16基因在雄性和雌性成年蜘蛛腹部的表达显著高于头部、胸部和足部。星豹蛛雄成蛛经LC10(5.151 mg/L)、LC30(8.619 mg/L)和LC50(12.311 mg/L)用溴氰菊酯处理12小时,PaCYP3001U16基因的表达受到抑制,而表达量在LC50处理下的表达最低。不同处理时间后,PaCYP3001U16基因经LC30溴氰菊酯的表达趋势不同。在2h和4h表现出诱导效应,4h时基因表达量最高,是对照的1.79倍。在第8、12和24小时表现出抑制作用,基因表达量在第24小时表现出最低水平。然而,基因表达量在第48小时开始增加,表现出诱导作用。PaCYP3001U16基因桌星豹蜘蛛在成年蜘蛛的不同发育阶段和不同部位有不同的表达水平,溴氰菊酯可以诱导该基因的表达。据推测,该基因参与了星豹蛛的生长发育和外源物质的代谢。