不同水解方法对DNA加合物分析鉴定影响的比较研究及应用

作者:武海江; 张雅姣; 刘勤; 陈佳; 徐斌; 徐华; 谢剑炜
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DNA加合物的分析和鉴定是高山研究的重要技术手段。不同的DNA水解方法可以获得碱基、核苷、核酸片段和其他产物形式,它们有各自的优点和适用的分析目的。以经典的芥子气烷基化试剂为模型化合物,进行溶液培养和动物中毒实验。采用加热水解、酸水解和酶水解三种常用的DNA水解方法对产物进行了质谱筛选和定量分析。针对不同的分析样品,系统比较了DNA加合物分析鉴定中常用的水解方法,以及不同加合物形式对水解效率的影响。结果表明,不同改性位点的稳定性存在差异。鸟嘌呤和腺嘌呤的N位加合物结构相对稳定,而鸟嘌呤O6位点加合物对酸和热不稳定。三种方法中,加热水解法水解效率较低。酸水解法高效稳定,产率比酸水解法提高10.4%~94.9%。产品中的基本形态超过99%。它更适合于已知结构的高通量、高灵敏度质谱的定量分析。酶水解法可以产生多种形式的碱基和核苷,产品信息丰富,适合于筛选和鉴定新的未知结构的加合物,但其酶水解效率受DNA加合物位点、基质效应和酶水解条件的限制,这很容易影响加合物的定量准确性。