摘要：<div>由于山楂种质的不同，山楂中含有的有效成分存在着明显的区别，导致山楂药材质量有一定的差异，直接影响到中成药的生产及临床疗效。不同种质的山楂形态学特征很相近，常规鉴定方法容易受到环境、种植模式、加工方法等因素的影响，寻求更加准确、可靠的方法尤为重要。虽然现在对山楂鉴定评价研究较多，但目前对不同种质山楂全面鉴定研究较少，特别是从分子水平对不同种质山楂的鉴定研究鲜有报道，针对这种现状，开展对不同山楂种质鉴定研究是非常重要的。为了建立山楂多学科的鉴定技术体系，本文通过收集不同种质山楂果实，记录其形态学特征；采用显微鉴定技术研究不同种质山楂药材粉末特征；采用薄层技术，对不同种质山楂进行鉴定研究，最后进行了山楂黄酮的提取研究。<div><div><div> </div><p style=“text-align: center”>
<img src=“/image/image?path=group8/M00/26/CE/wKgIO2IAyEiAGq5WAAcm_RY5_bc104.png”></p><div>目前我国野生山楂很少，药用山楂主要是栽培品。此外，广西大果山楂在中成药生产中有混淆使用的情况。山楂的开发利用价值很高，具有消食健胃、活血化痰、行气散瘀的功效，山楂叶中含有大量的黄酮类化学成分，山楂花中氨基酸成分含量很高，能够治疗缺铁性贫血、心律不齐等病症，山楂核具有催产、杀菌等功效，特别是从山楂中提取的山楂干馏油，具有很强的杀菌作用。传统上山楂主要作为健胃消食药，现代研究发现其在抗心脑血管疾病以及免疫系统疾病等具有显著疗效，近年来，对山楂的化学成分研究、药理研究等方面取得了很多新成果，在山楂种质资源、种植技术、炮制技术、质量控制等方面也有新进展。
我国山楂种质资源非常丰富，选育品种众多，根据各种质特点，科学充分的利用优质山楂种质资源，不仅能够满足山楂的市场需求，还能提高山楂的经济效益，增加山楂果农的收入。王光全等通过评价山东山楂种质的农艺性状和果实品质，筛选出山东优质山楂种质包括大果厚肉种质、高糖鲜食种质、高维生素C种质等。张宏平等总结了我国主要的山楂品种，有大果型山楂、鲜食兼加工型品种、黄果类品种、鲜食型、早熟型、紫肉型等，并根据各山楂种质特征为我国山楂的种质资源发展提出了科学的建议。不同的山楂种质，营养成分有差异，可以满足不同的需求，对不同种质山楂中有效成分含量进行研究，可为山楂育种或加工提供科学依据。为选出营养丰富、品质较好的山楂种质，柏素花等对11个山楂品种的营养成分进行测定分析，认为含可溶性蛋白比较多的山楂品种为大金星、兴隆等，雾灵红中糖分含量最高，燕瓤红的综合营养品质最好
1.2山楂的鉴定与质量控制研究
1.2.1鉴定研究
山楂中有效成分很多，2015版《中国药典》中仅鉴定其中的熊果酸，山楂的易混淆品、伪品等可能也含有熊果酸成分，仅凭熊果酸的薄层层析结果很难准确的鉴定山楂药材。梁淑芳等分别提取山楂果及叶中的黄酮类化合物，并对提取的成分进行薄层色谱分离鉴定，该新方法以微乳液为展开剂在聚酰胺薄层上展开，山楂果及山楂叶样品各得到了7个不同的黄酮类化合物斑点，为山楂薄层色谱鉴定提供了参考依据。冯海霞等对20份不同品种的山楂嫩叶进行RAPD分析，结果显示不同山楂种质中遗传距离不同，表现出遗传多样性，该方法能够很好的鉴定不同种质的山楂。杨明霞等通过对我国山楂的育种方法、选育品种以及分子标记技术的应用发展进行论述，为山楂的分子鉴定研究提供了参考依据。山楂中有效成分的作用不是单一成分的作用，树立中药成分研究的整体观念对山楂的鉴定研究很有帮助，因此开展中药指纹图谱研究是非常有必要的。龙凤等优化色谱条件，以绿原酸色谱峰为基准，建立了山楂的HPLC指纹图谱，得到12个共有峰，本实验结果及指纹图谱方法可为山楂鉴定及质量标准的建立提供参考依据。罗文等以乙腈-0.01%甲酸水为流动相，对样品进行梯度洗脱，得到23个共有峰，该方法稳定且重现性好。汤树良等通过研究不同植物来源的山楂药材的HPLC指纹图谱方法，为山楂药材的鉴定分析提供了参考依据。陈宝龙等采用HPLC梯度洗脱的方法，建立山楂药材黄酮类指纹图谱，该方法出峰多，分离度好，操作简单，且流动相毒性小，比较安全。
1.2.2质量控制研究
2015版《中国药典》中，对山楂的质量评价是依据山楂中有机酸含量的多少，有机酸的测定方法为酸碱滴定法。随着人们对山楂化学成分及药理作用的深入研究分析，肖志红等认为豫北红山楂及大金星山楂质量最好，可作为优质品种推广种植。张建逵等通过测定山楂果实中有机酸、总黄酮、可溶性糖、芦丁、金丝桃苷、槲皮素等成分含量，评价不同种质的山楂果实质量，结果发现“绵山里红”更适合食用，“铁山里红”更适合药用。孟庆杰等对18个不同山楂种质进行成分测定分析，该方法简单易行，可作为质量控制参考依据。不同山楂种质器官中总黄酮含量不同，王光全等测定了不同种质山楂各器官中的总黄酮含量，结果叶片中平均总黄酮的含量最多，幼茎中总黄酮的含量次之， 根中总黄酮含量最少，为山楂各部分资源的开发利用及质量标准建立研究提供了参考依据。连建国等用分光光度比色法测定新山楂品种果实中的总黄酮成分，对不同黄酮类化学成分同时进行定量分析，该方法值得我们深入研究，章弘扬等以HPLC方法，研究山楂中黄酮类成分，得到可以同时测定多种黄酮类化合物的方法。肖志红等通过对山楂的种类、主栽品种及营养成分等进行论述，认为现在的山楂质量标准需要我们改进。罗嘉琪等对山楂中8种成分进行了含量测定分析，并得出这8种有效成分的最佳提取条件。
2山楂的化学成分
2.1有机酸酸类
山楂中含大量的有机酸类成分，主要有熊果酸、绿原酸、枸橼酸、山楂酸等。山楂中的维生素C成分在这些有机酸的作用下，即使经过加热的炮制加工，也不会被破坏。陈龙胜等从山楂果中提取分离得到山楂酸，科罗索酸，齐墩果酸，熊果酸4种三萜酸成分，并且科罗索酸首次从山楂中分离获得。大果山楂中含有大量山楂酸，陈秋虹等采用超高效液相色谱法测定大果山楂中山楂酸含量，结果5批样品中山楂酸含量在20.1~26.7mg/100g之间，为大果山楂的质量控制提供了参考。
2.2黄酮类
目前人们已经从山楂中分离得到了60多种黄酮类化学成分，主要有异槲皮素、金丝桃苷、芦丁、牡荆素鼠李糖苷等。孙协军等采用树脂法分离山楂中黄酮类成分，纯化后得到芦丁、金丝桃苷和槲皮素的总含量达到65.47%。韩春辉等采用多种色谱技术，分离得到了牡荆素和芦丁两种化学成分。
2.3其他成分
山楂中除了上述两类成分外，还含有其他类化学成分，包括山楂多糖、维生素、果胶、色素、微量元素等。邓旭坤等测定研究山楂多糖的含量和构成，结果发现山楂多糖含中性多糖、糖醛酸及7种单糖。周晨晨等采用不同的分离方法，从山楂叶中得到了13种新的芳香类化合物。晏仁义等从山楂提取物中分离纯化得到了表儿茶素、eucomicacid、kasispy-rol等成分。山楂中还含有花色苷类成分，汪静静等通过对山楂中花色苷类进行分离纯化鉴定，得到了矢车菊素-3-O-β-半乳糖苷和矢车菊素-3-O-α-阿拉伯糖苷两种成分。山楂核中也含有大量的化学成分，羡冀等采用多种分离方法，首次从山楂中分离出4种新化合物。李殿明等对山楂核水层的化学成分进行分离纯化，并进行鉴定分析，得到5种化合物，其中(1R，2S，5R，6S)-2-(3，4，5-trimethoxyphenyl)-6-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-3，7-dioxabicyclo［3.3.0］octane首次从山楂属植物中分离得到。李玲芝等从山楂核中分离纯化得到新降木脂素等4种化合物。
3药理作用
3.1对消化系统的作用
山楂是经典的健胃消食药，犹善消油腻之食。近代研究表明，人体服用山楂后，胃中消化酶分泌量显著增加，且酶的活性也明显增强，以此促进消化吸收。张美英等通过在AA+肉鸡日粮中添加不同剂量的山楂提取物来探究山楂提取物对实验肉鸡一些消化指标的影响，实验结果显示，AA+肉鸡的平均采食量、平均日增重、胰腺脂肪酶、淀粉酶活性以及对高粗蛋白等的表观消化率明显提高。
3.2对心血管系统的作用
山楂中的黄酮类化学成分具有很强的降血脂作用，大果山楂中也含有较多降血脂作用的成分，陈兵兵等通过测定不同分组大鼠试验后的血清总胆固醇等指标，发现大果山楂黄酮提取物对大鼠体内血脂指标有显著降低作用。山楂提取物还具有降血压的功效，通过抑制细胞外Ca2+内流，使外周血管扩张，达到持续降压的作用。
3.3抗氧化的作用
很多研究发现，山楂提取物能够抗氧化，赵江等以高脂损伤的果蝇为研究对象，对各组饲喂不同剂量山楂提取物，然后测定果蝇体内的各抗氧化酶活性和能够存活的时间，结果发现山楂提取物能够保护果蝇氧化损伤，同时可以延长果蝇的存活时间。山楂中有机酸类成分能够抑制氧化应激造成的损伤，保护受损伤细胞，权赫秀等以经H2O2诱导而造成损伤的H9C2心肌细胞为试验对象，以细胞增殖光密度值SOD、MDA等为指标，利用MTT法、试剂盒测定法等对各试验组进行测定，发现山楂有机酸组中H9C2心肌细胞数量增加了，说明山楂中有机酸类成分能够保护损伤的心肌细胞。陈希苗等通过对山楂多酚、黄酮等在模拟胃肠消化中含量的变化进行研究分析，发现胃肠中山楂多酚含量与其抗氧化能力成正比。宓伟等研究发现山楂中的原花青素和维生素C具有保护肾脏的作用。
3.4其他作用
山楂还有保肝、抑菌、免疫调节、抗心律不齐、抗肿瘤、抗疲劳、活血化瘀等药理作用。研究发现，山楂多糖通过调节细胞的生长、分裂、分化、衰老等生理活动在人体内发挥抗肿瘤、抗衰老、增强免疫等作用。赵胜男等分别用4种方法来提取优质的山楂叶样品，得到提取物后，以高、中、低三种剂量对急性血瘀模型大鼠灌胃给药，8天后测定4种凝血指标，结果发现各提取物均具有活血化瘀的作用。许瑞波等以抑菌直径为指标，研究山楂叶中的总黄酮类成分对3种菌的抑制作用，结果山楂叶总黄酮类成分可以非常有效的抑制这3种菌，而且总黄酮的浓度与抑制作用成正比，总黄酮浓度升高，抑制作用也会随着增强。赵重博等深入研究不同炮制方法加工后的山楂饮片在体外的抗菌作用，得出焦山楂饮片对实验所用的15株标准致病菌抑制作用最强，抑菌效果最好。
4山楂的鉴定实验
4.1果实鉴定
从每个种质样品中选取1个代表性果实，拍照记录如图4-1的1～12，并描述不同种质山楂果实的性状鉴定要点。
图4-1不同种质山楂果实性状
山楂种质不同，外观性状差别较大，相同品种但产地不同的山楂，差异小，例如1号和8号、5号和9号。在选取的这些山楂种质中，1号大金星山楂单果重约为11～15g，辽宁产地大金星山楂比山东产地大金星山楂略小，6号山东超金星平均单果重比1号山东大金星山楂果更大一点，超金星山楂和大金星山楂都属于金星品系，因此大金星山楂与超金星山楂性状上很相似。在这些样品中，人们对7号山东甜红子山楂的风味评价最高，它具有浓香气，单果重约7g，属于山楂中的高端品种，2017年市场价约为10元每斤，由于甜度高，适合生食。4号山东山里红果小，单果重约2g，但是口感很好。2号歪把红山楂最显著的特点是果柄处略有歪斜的肉瘤状突起，与山楂商品名称相符。3号山东大绵球山楂，果大，但它的果皮很薄并且肉质软面，带有香味。大五棱山楂的萼洼周围有明显的状如红星苹果的五棱突起。10、11号广西大果山楂，果皮颜色与果型明显与1～9号山楂不同，与苹果、雪梨形状很像。12号广西野生山楂在外观上与10、11号也有明显区别，果萼外凸。10、11、12号果实口感发涩，明显不如1～9号可口，广西当地人主要是用糖水加工后食用，或者作为药用。在耐储性实验中发现6号山东超金星、1号山东大金星、8号辽宁大金星烂果很少，好果率高，耐储性好，3号山东大绵球山楂最不耐储藏。广西大果山楂以及广西野生山楂也比较耐储藏。
4.2山楂的显微鉴定实验
山楂的性状鉴定可以为山楂药材的鉴定提供一种方法，但是以山楂粉末生产的中成药，性状鉴定很难凑效。调查发现，有以广西大果山楂代山楂投料生产中成药的情况，显微鉴定在此情况下可发挥有效作用。与其它传统鉴定方法相比，显微鉴定具有简便、准确、快速、实用等优点。2015版《中国药典》中规定山楂粉末暗红棕色至棕色，主要的显微特征为石细胞、果皮表皮细胞、草酸钙方晶或簇晶。通过对不同种质山楂的粉末进行鉴定研究，能快速有效地鉴定出山楂的混淆品。因此，进行山楂药材粉末鉴定对于确保临床用药的有效性和安全性具有实际意义。本文通过对收集的10个山楂种质进行显微鉴定研究，以期为山楂种质的鉴定及山楂药材质量标准的提升提供一定依据。
4.2.1实验方法
将以上山楂样品粉碎，过6号筛（1-250µm）。分别取不同种质山楂粉末少许，置于洁净的载玻片上，加水合氯醛试液1~2滴，用酒精灯加热、透化，再加稀甘油1滴，盖上盖玻片，显微镜（目镜40×）下观察。观察淀粉粒时，为避免淀粉粒受热后糊化，不加热，直接观察。
4.2.2实验结果
不同种质山楂的粉末显微特征有差别，具体形态见图2-1的1～7。8～10号山楂在显微镜下观察可见：1.果皮表皮细胞呈多角形、类方形等，壁增厚，含棕黄色块状物。2.石细胞多，有的很大，直径65～167μm，呈细长形，类圆形、多边形，胞腔很大，孔沟及层纹明显。3.纤维多，无色，两端细尖，或钝圆，细胞壁略增厚。4.淀粉粒单粒较多，呈椭圆形、类圆形、三角形或耳形，直径约3～10μm，脐点不明显。5.导管较少，主要为螺纹导管，有的呈红棕色。6.色素块：呈不规则黄棕色、红棕色块状物，大小形状不一。具体形态见图4-2的8～10。1～7号各种质山楂样品粉末特征的主要区别点：3号山东大绵球中淀粉粒、纤维特别多，石细胞很少，4号山东山里红石细胞比较多，2、5号中淀粉粒也比较多。8～10号山楂样品粉末特征的主要区别点：8号、9号广西大果山楂导管少，10号果皮表皮细胞大小差别大，不均匀，排列欠整齐，石细胞众多，大，色素块颜色淡且少。
图4-2不同种质山楂显微鉴定特征
（1大金星、2歪把红、3大绵球、4山里红、5大五棱、6超金星、7甜红子、8苹果型大果山楂、9雪梨型大果山楂、10野山楂）
4.3山楂的薄层鉴定实验
目前关于山楂的薄层鉴定研究较少，在2015版《中国药典》中，山楂的薄层鉴定方法仅鉴别其中的熊果酸，有的山楂混淆品中也常常含有熊果酸，它不是山楂的专属性成分，现代研究发现山楂的主要有效成分为黄酮类和有机酸类，以熊果酸来鉴别山楂的薄层方法已经无法满足山楂多种有效成分鉴定的要求，因此建立一种更加完善的山楂药材的薄层鉴定方法十分必要。本文中采用改良的提取方法，鉴定山楂中有机酸和黄酮两类化学成分。
4.3.1山楂薄层方法的建立
（1）实验材料
仪器与试剂
FW-80高速万能粉碎机（北京市光明医疗仪器有限公司）；ZF-2型三用紫外仪（上海市安亭电子仪器厂）；LC-350A超声波中药处理机（济宁市中区鲁超仪器厂）；电子天平（梅特勒—托利多仪器公司）；对照品熊果酸购于中国药品生物制品检定所，批号：742-9405。试剂均为分析纯。
样品来源
同本文第三部分1.1.2项下表2-1，样品粉碎后，过6号筛，备用。
（2）实验方法
照薄层色谱法（《中国药典》2015版(通则0502)）试验，按照山楂项下薄层鉴1.3实验结果
在日光和紫外灯下，不同的山楂供试品色谱与熊果酸对照品色谱，在相同的位置有相同颜色的斑点，日光下为紫红色，紫外灯下为亮紫色，但是各供试品斑点的大小、强弱不完全相同。其中4、6、8号斑点较大且深，9、10号斑点较小且颜色稍浅。从薄层图谱上可以看出，在药典展开条件下，熊果酸分离度不是很好，斑点下方有浅蓝色斑点成分，8~10号比较明显。
4.3.2山楂的薄层鉴定方法的优化研究
（1）实验材料
1）仪器与试剂
ZF-2型三用紫外仪（上海市安亭电子仪器厂）、HH-4数显恒温水浴锅、电子天平（梅特勒—托利多仪器公司）；芦丁购于中国药品生物制品检定所，批号：100080-200306；金丝桃苷购于中国食品药品检定研究院，批号：111521-201507；异槲皮素对照品购于上海诗丹德标准技术服务有限公司，批号：5835；试剂均为分析纯。
2）对照品溶液的制备
精密称取熊果酸、芦丁、金丝桃苷、异槲皮素对照品适量，置容量瓶中，加甲醇分别制成每毫升含1.04mg、0.08mg、0.10mg、0.22mg的对照品溶液，即得。
（2）薄层色谱实验条件
1）展开剂为石油醚-乙酸乙酯-甲酸（4：1：0.01），其余条件同2015版《中国药典》山楂项下薄层鉴别展开条件进行。见图4-3。
2）分别吸取供试品溶液、对照品3μL，点于同一硅胶G薄层板上。以乙酸丁酯：甲酸：甲醇：乙酸（15：1.5：0.2：1）为展开剂，展开，取出，晾干，在紫外灯下（365nm）观察，然后喷以显色剂10%硫酸乙醇溶液，105℃加热至显色，紫外灯（365nm）下观察。见图4-4、4-5。（3）本实验中展开剂为乙酸乙酯：甲酸：乙酸：水：氯仿（15：1.5：1：0.5：0.5），其余方法与2.4薄层色谱实验条件下(2)相同。见图4-6。别展开条件进行，然后置紫外灯（365nm）下检视。结果见图3-1。
（3）实验结果
在山楂熊果酸成分的薄层鉴定中，展开条件改进后，斑点的Rf值有改变，明显比药典条件分离度更好，各山楂种质药材斑点差别也比较明显，其中7号斑点最大且颜色较深，10号斑点最小且颜色较浅，说明7号山楂中熊果酸成分含量比较高，10号含熊果酸较少。
在（2）条件下，8~10号种质山楂较1~7号有明显区别，在未喷显色剂前，紫外灯下检视，1~7号以及芦丁、金丝桃苷、异槲皮素对照品均无显色斑点，8~10号种质山楂在紫外下对应位置有相同斑点，说明8~10号与其他样品成分差别较大。喷显色剂后，1~7号各样品与对照品对应位置有相同颜色斑点，但斑点的大小强弱不完全相同。8~10号各样品与对照品颜色略有区别。各样品与芦丁对应斑点颜色微弱，说明含量都比较低，3、4号斑点稍深，说明这两个种质中芦丁成分含量稍高，各样品与金丝桃苷对应斑点中，4、7号斑点颜色较深且比较大，说明这两个种质中金丝桃苷含量较高。各样品中与异槲皮素对应斑点分离度不是特别好。改良展开剂后，斑点的Rf值有改变，金丝桃苷与异槲皮素分离度更好。
图4-3不同种质山楂药材薄层色谱图
（S1熊果酸对照品色谱，1~10供试品色谱）
图4-4不同种质山楂药材薄层色谱图
（S1熊果酸对照品色谱，1~10供试品色谱）
图4-5不同种质山楂药材未喷显色剂紫外光下薄层色谱图
（S1~S3分别是芦丁、金丝桃苷、异槲皮素对照品色谱，1~10供试品色谱）
图4-5不同种质山楂药材薄层色谱图
（S1~S3分别是芦丁、金丝桃苷、异槲皮素对照品色谱，1~10供试品色谱）
图4-6不同种质山楂药材薄层色谱图
（S1~S3分别是芦丁、金丝桃苷、异槲皮素对照品色谱，1~10供试品色谱）
在供试品的制备方法中，药典方法是1g药材加入4ml乙酸乙酯，超声15min取续滤液，此制备方法能有效提取熊果酸成分，但是山楂中黄酮类成分的提取率很低，作为供试品溶液浓度过低，通过改良的提取方法，可以高效提取山楂中有机酸和黄酮类成分。
不同种质的山楂供试品色谱均与对照品有相应的斑点，但斑点的大小强弱不完全一样，说明不同种质的山楂成分含量有差异。1-7号山楂与8-10号山楂薄层色谱明显不同。本实验建立的薄层方法可有效的鉴定山楂药材，以及北山楂和混淆品广西大果山楂，为山楂种质鉴定提供了依据。改良了2015版《中国药典》关于山楂薄层鉴定的展开条件，并且增加了黄酮类有效成分的鉴定，完善了山楂的薄层鉴定方法，具有极高的实用价值。
5山楂黄酮的提取
5.1理论依据
黄酮基本结构是2-苯基色原酮，母核上常有-OH、-OCH3等取代基，并常以甙的形式存在。山楂中的黄酮主要牡荆碱鼠李糖甙（C21H22O10）、单乙酰牡荆碱鼠李糖甙和金丝桃甙（C21H20O12），黄酮母核上所含的的游离羟基与铝盐形成络合物，此络合物在紫外区有特征吸收峰[15]，以此利用紫外可见分光光度计的朗伯-比尔定律，即当一束平行单色光通过含有吸光物质的稀溶液时，溶液的吸光度与吸光物质浓度、液层厚度成积成正比[16]。可用于测定黄酮含量。
槲皮素（C15H10O7）：又名栎精，槲皮黄素，溶于冰醋酸，碱性水溶液呈黄色，几乎不溶于水，乙醇溶液味很苦。化学名(-)-2-（2-氯苯基）-5,7-二羟基-8-[(3S,4R)-3-羟基-1-甲基-4-哌啶基]-4H-1-苯并吡喃-4-酮盐酸盐,分子量302，容点位304℃。所以不以水作为溶解剂，水能溶解大山楂丸中的蛋白质，在样品中有杂质产生，对紫外可见分光光度计产生干扰，所以以甲醇作为溶剂，消除了杂质的干扰。
5.2实验仪器及样品
722型光栅紫外可见分光光度计（上海光化学仪器厂）、赛多丽丝普及型分析天平GL124-1SCN、旋转蒸发仪RE－52AA(上海亚荣生化仪器厂)。
标准品槲皮素（中国药品生物制品鉴定所）、样品大山楂丸（市售品）。
5.3试验方法
精密量取对照品溶液0.0mL、5.0mL、10.0mL、15.0mL、20.0mL、25.0mL，分别置50mL 量瓶中，各加50%的乙醇溶液使成25ml，加5%亚硝酸钠溶液1.5mL，摇匀，放置6min加10%硝酸铝溶液1.5mL，摇匀，再放置6min，加1%的氢氧化钠溶液20mL，分别用50%的乙醇稀释至刻度，摇匀，放置15min，以第一瓶试剂为空白，立即在 510nm 波长下用 722型光栅紫外可见分光光度计测定吸光度。并以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标（见5-1），绘制标准曲线，并计算其回归直线方程。（见5-2）
图5-1以不同浓度XXX对照样品的吸光度绘制的标准曲线
由上表所得数据进行线性分析，得槲皮素浓度(mg· ML-1)与吸光度(A)之间的回归方程为：y=8.771x+0.004，r=0.999。通过回归方程和标准曲线可以看出，槲皮素对照品浓度在0.0～1.0×10mg·mL-1范围内呈良好的线性关系。
正交试验设计：本实验研究对大山楂丸中总黄酮类化合物提取因素进行优化分析，设计四因素、四水平正交试验，以乙醇浓度(%)、提取温度（℃）、回流时间（h）、混匀转速（r/min）作为四因素进行优化实验，进行九组实验就能反映出最优效果。故见（表三）正交试验设计表、（表四）正交试验因素水平表。
表5-1优化大山楂丸中总黄酮提取研究正交实验因素及水平
因素 A B C D
水平 乙醇浓度% 提取温度℃ 回流时间（h） 混匀转速(r/min)
1 25 70 0.5 90
2 50 80 1.0 120
3 70 90 2.0 150
表5-2优化大山楂丸中总黄酮提取研究正交实验结果
实验号 因素 黄铜含量
A B C D
1 1 1 1 1 23.63
2 1 2 2 2 27.70
3 1 3 3 3 26.38
4 2 1 2 3 30.92
5 2 2 3 1 26.49
6 2 3 1 2 26.01
7 3 1 3 2 44.83
8 3 2 1 3 38.62
9 3 3 2 1 41.38
K1 77.70 99.37 91.01 91.49 77.70
K2 83.42 92.81 100.00 98.54 83.42
K3 124，83 93.77 97.70 95.92 124，83
注：四因素三水平正交实验设计中的实验条件分别是：
1：乙醇浓度25%、提取温度70℃、回流时间0.5h、混匀转速90r/min，
2：乙醇浓度25%、提取温度80℃、回流时间1h、混匀转速120r/min
3：乙醇浓度25%、提取温度90℃、回流时间0.5h、混匀转速150r/min
4：乙醇浓度50%、提取温度70℃、回流时间1h、混匀转速150r/min
5：乙醇浓度50%、提取温度80℃、回流时间2h、混匀转速90r/min
6：乙醇浓度50%、提取温度90℃、回流时间0.5h、混匀转速120r/min
7：乙醇浓度70%、提取温度70℃、回流时间2h、混匀转速120r/min
8：乙醇浓度70%、提取温度80℃、回流时间0.5h、混匀转速150r/min
9：乙醇浓度70%、提取温度90℃、回流时间1h、混匀转速90r/min
5.4结果与分析
山楂总黄酮较理想的提取工艺方案是 A3B1C2D2，即在乙醇浓度为70%、提取温度为70℃、回落提取1h、混匀转速为120r/min为最佳提取条件。

总结
山楂果实富含多类营养物质和微量元素，具有消积健胃，降血压、血脂，抗氧化，保护肝脏、肾脏等功效，山楂的治疗与保健作用使其需求量日益增大。但是目前山楂药材有混淆品，影响疗效。因此，对山楂种质进行鉴定研究十分必要。进行了不同种质山楂的薄层鉴定研究，2015版《中国药典》中，仅鉴定楂中熊果酸成分，而山楂的易混淆品中也含有该成分，缺乏专属性的鉴定方法。通过改良药典中薄层色谱方法，用一种提取方法同时检测不同种质山楂的两类有效成分，而且能有效的鉴定山楂及其易混淆品。随着对生物总黄酮与人类营养关系研究的深入，不远的将来可能证明黄酮类化合物是人类必须的微营养素或是必须的食物因子。<p><br></p></div></div></div></div>